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產(chǎn)品名稱:solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):D2300-50

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒
真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,種超過10萬個(gè)。真菌通常又分為三類,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。對(duì)于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對(duì)于大型真菌,可直接用液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液,用硅質(zhì)膜吸附,即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencin

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D2300-50solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒的詳細(xì)資料:

號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格價(jià)格
D2300-50真菌基因組DNA提取試劑盒50T500.00
D2300-50真菌基因組DNA提取試劑盒100T850.00

solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒
 真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,種超過10萬個(gè)。真菌通常又分為三類,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。對(duì)于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對(duì)于大型真菌,可直接用液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液,用硅質(zhì)膜吸附,即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
操作步驟: 使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。 1、樣品的處理: 1)對(duì)于酵母菌,取1-2ml培養(yǎng)好的菌液,離心收集,棄上清。加入200ul 溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5-10min。 2)霉菌(孢子也可相同處理):取50-100mg菌絲,加200ul溶液A,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約30min。 3)大型真菌(如蘑菇等):稱取50-100mg樣品,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù)3 次,使樣品研成粉末(如無液氮,可加200ul溶液A后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨),加200ul溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5min。 2、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,55℃水浴消化,30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,12000rpm離心2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。 3、在上清中加入200ul溶液B,充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,可放55℃水浴5min,沉淀即會(huì)消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說明樣品消化不*,可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純,還有可能導(dǎo)致上柱后堵
柱子,請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。 4、再加入200ul無水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置2分鐘。 5、12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。 6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。 7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。 8、12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。 9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心1min。 10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒
注意事項(xiàng): 1. 由于真菌種類萬千,對(duì)于一些特別難處理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理,一般都可以得到一定量的基因組DNA,如電泳檢測(cè)很弱,一般PCR都會(huì)有較好結(jié)果。 2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在55℃水浴中重新溶解。 3. 如果DNA提取量很少,可加長(zhǎng)玻璃珠處理時(shí)間,如果提取DNA成彌散短條帶,可減少玻璃珠處理時(shí)間。 4. 洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,體積過小會(huì)影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。 5. DNA濃度及純度檢測(cè):得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。 6. 在確保樣品無誤的情況下,如經(jīng)過多次試驗(yàn),都無法提出DNA,請(qǐng)將部分樣品寄我公司,我們代為摸索優(yōu)化條件,以使您的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘_M(jìn)行下去。


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